TY - RPRT T1 - Belgian recommendations for analytical verification and validation of immunohistochemical tests in laboratories of anatomic pathology Y1 - 2024 A1 - H. Verbeke ED - D. Van Hecke KW - CE-IVD test KW - immunohistochemical test KW - laboratory developed test KW - VALIDATION KW - Verification AB -

Analytical verification and validation of immunohistochemical tests and their equipment are common practice for today’s anatomic pathology laboratories. Few references or guidelines are available on how this should be performed. The study of Sciensano (the Belgian national competent authority regarding licensing of medical laboratories) performed in 2016, demonstrated a significant inter laboratory variation in validation procedures of immunohistochemical tests among Belgian laboratories. These results suggests the unavailability of practical information upon the approach to verification and validation of these tests. The existing Belgian Practice Guideline for implementation of a quality management system in anatomic pathology laboratories has been reviewed to meet this demand and additionally to prepare the laboratories for the EU - IVD revised regulations (IVDR).

This paper describes Belgian recommendations for verification and validation of immunohistochemical tests prior to implementation, for ongoing validation and for revalidation. For each type of test (according to the IVDR classification and the origin) and its intended use (purpose), it addresses how to perform analytical verification/validation by recommending: (i) the number of cases in the validation set, (ii) the performance characteristics to be evaluated, (iii) the objective acceptance criteria, (iv) the evaluation method for the obtained results and (v) how and when to revalidate. A literature study and a risk analysis taking into account the majority of variables regarding verification/validation of methods have been performed, resulting in an expert consensus recommendation that is a compromise between achievability, affordability and patient safety. This new consensus recommendation has been incorporated in the aforementioned ISO15189:2012 based Practice Guideline.

PB - Wolters Kluwer Health CY - Waltham, MA VL - 32 UR - https://journals.lww.com/appliedimmunohist/fulltext/9900/belgian_recommendations_for_analytical.139.aspx M3 - 10.1097/PAI.0000000000001165 ER - TY - RPRT T1 - Directive Pratique pour la mise en place d'un système qualité dans les laboratoires d'anatomie pathologique agréés dans le cadre de l'Arrêté d'agrément Y1 - 2022 A1 - H. Verbeke KW - laboratoire d'anatomie pathologique KW - Système qualité AB -

L’Arrêté Royal du 5 décembre 2011 concernant l’agrément des laboratoires d’anatomie pathologique (ci-dessous « l’Arrêté d’agrément ») liste les exigences de qualité auxquelles un laboratoire d’anatomie pathologique doit satisfaire pour pouvoir être et rester agréé par le Ministre qui a la Santé publique dans ses attributions.

L’Arrêté d’agrément délègue à la Commission d’Anatomie Pathologique la rédaction de Directives Pratiques, qui doivent aider les laboratoires à établir leur propre manuel qualité. Ce manuel décrit le système qualité d’un laboratoire et a pour objectif de pouvoir démontrer la qualité des examens (prestations) remboursés par l'assurance maladie réalisés au sein d’un laboratoire d’anatomie pathologique dans le cadre de l’Arrêté d’agrément. Un système qualité est un processus systématique et continu dans lequel toutes les activités du laboratoire sont décrites, documentées, mises en œuvre et contrôler.

Bien que, par essence, ‘unique’ pour chaque laboratoire, le système qualité d’un laboratoire agréé doit répondre à toutes les exigences de qualité reprises dans l’Arrêté d’agrément et la Directive Pratique. Ces exigences doivent donc être mises en pratique dans chaque laboratoire. Ce faisant, le principe de proportionnalité ou l'évaluation de la proportionnalité sont toujours pris en compte.

Dans ce contexte, la Directive Pratique doit donc être comprise en premier lieu comme un ensemble interprétatif et non-limitatif de conseils et ne remplace en aucun cas l’Arrêté d’agrément lui-même. La Directive Pratique concerne la totalité du système qualité, de la phase pré-analytique à la phase post-analytique, et reprend donc toutes les instructions en rapport avec l’analyse anatomo-pathologique d’un échantillon, depuis son prélèvement et sa réception au laboratoire jusqu’à l’élaboration professionnelle d’un avis sur l’analyse prescrite, la rédaction d’un compte rendu (protocole) et sa transmission. Un système qualité efficace et efficient est essentiel pour fournir des services de laboratoire cohérents, de haute qualité et rentables aux cliniciens et au patients.

Dans la phase analytique, l’importance de vérification et de la validation est soulignée dans dans le contexte de la réglementation européenne de 2017/746 du 5 avril 2017 sur les dispositifs médicaux de diagnostic in vitro (IVDR). Selon cette réglementation IVDR qui entrera en vigueur le 26 Mai 2022, seuls les IVD certifiés CE pourront être utilisés dans les laboratoires et uniquement selon les spécifications du fabricant (notice). Si vous dérogez à cette règle, le test est reclassé comme un test développé en interne ou LDT (« Laboratory Developed Test ») et est soumis à une validation plus lourde et à des conditions plus strictes de l’IVDR. Bien que l’IVDR ne définit pas le LDT et ne fait pas de distinction supplémentaire au sein des tests LDT, dans cette Directive pratique LDT a été catégorisé en fonction du type (CE-IVD modifié ou non CE-IVD) du test et de la présence ou l’absence d'une référence, sur la base des résultats consensuels de l'analyse des risques. Les missions de validation pour chaque catégorie LDT sont le résultat d’un compromis entre la faisabilité, l'abordabilité, les obligations de l’IVDR (art 5.5) et la sécurité des patients. La catégorisation des LDT basée sur les risques et les missions de validation associées élaborées dans cette Directive Pratique se traduira par une approche plus objectivée, harmonisée à l'échelle nationale, normalisée et fondée sur l'analyse des risques et la science pour valider les tests analytiques et démontrer leurs performances analytiques.

L’article 5.5 de l’IVDR stipule qu’un test non CE-IVD ne peut être utilisé (et fabriqué à un niveau non-industriel) que lorsqu’un test CE-IVD équivalent disponible sur le marché ne satisfait pas au niveau performance, et ce dans un système de qualité approprié conforme à la norme ISO 15189 ou, le cas échéant, avec les dispositions nationales applicables. Ces dispositions nationales applicables dans le contexte de l’agrément des laboratoires d’Anatomie Pathologique est la Directive Pratique.

Nous avons délibérément choisi d’utiliser la norme de qualité internationalement reconnue NBN EN ISO 15189:2012 comme base d’élaboration de cette Directive Pratique. Tous les laboratoires d'anatomie pathologique agréés ont en effet intérêt à obtenir un agrément élargi (y compris sur la scène internationale) de leur système qualité. Ce système qualité agréé permet de gagner la confiance légitime des intéressés et de développer une systématique reconnue internationalement en termes d’assurance qualité et d’amélioration continue.

Ce choix vise également à rencontrer la réalité de laboratoires de plus en plus nombreux qui ont implémenté un système qualité suivant des normes internationales, et offre un bon fondement aux laboratoires visant à une accréditation ISO 15189 (à terme). Il est également évident que chaque laboratoire doit implémenter son propre système qualité basé sur l’Arrêté d’agrément et la Directive Pratique, dans lequel tous les chapitres de la Directive Pratique ne doivent pas nécessairement être d’application. Il peut bien sûr y avoir des écarts par rapport à la Directive Pratique, mais au moyen d’une motivation étayée, et idéalement sur la base d’une analyse des risques effectuée par le laboratoire même. Chaque laboratoire peut également implémenter un classement original du manuel qualité, pour autant que tous les éléments normatifs repris dans l’Arrêté d’agrément et la Directive Pratique soient intégrés.

La norme NBN EN ISO 15189:2012 fixe des exigences claires, mais du fait du manque d’explications concernant une série d’aspects propres à l’anatomie pathologique, elle laisse une plus grande marge d’interprétation et de confusion. La Directive Pratique est beaucoup plus explicite. Contrairement à la norme ISO 15189 :2012 qui omet systématiquement d'expliquer concrètement ce qu'il faut faire, et laisse ainsi une assez grande liberté d'interprétation, la Directrice Pratique précise très concrètement comment les éléments de la norme peuvent être étoffés. Le cas échéant, nous avons également consulté les directives des organisations de pathologie internationales telles que le CAP (College of American Pathologists) afin d’encore clarifier ces aspects et de les interpréter pour les adapter à la réalité des laboratoires d’anatomie pathologique.

Il convient de distinguer clairement l’agrément d’un laboratoire d’anatomie pathologique (par le Ministre, suivant les exigences de l’Arrêté d’agrément) de l’accréditation ISO (par BELAC, suivant la norme NBN EN ISO 15189). Cette distinction est essentielle pour une approche et une interprétation correctes de la Directive Pratique qui ne concerne que l’agrément des laboratoires et qui peut être utilisée pour satisfaire aux exigences de l’Arrêté d’agrément.

La Directive Pratique peut être considérée comme un fil conducteur pour les évaluations externes réalisées par Sciensano et par la Commission d’Anatomie Pathologique en vue d’accorder et de maintenir un agrément. Il est important de souligner qu’un laboratoire d’anatomie pathologique est évalué et agréé dans sa totalité et non sur la base d’éléments spécifiques ou d’un nombre limité de tests diagnostiques (contrairement à l’accréditation). Lors des visites effectuées par Sciensano ces dernières années, il a été constaté que certains aspects de Directive Pratique étaient insuffisamment élaborés et expliqués pour garantir une application adéquate au sein du système qualité. Pour cette raison, il a donc été décidé de réviser la Directive Pratique et de réviser complètement ou non et/ou d'expliquer plus en détail certains chapitres.

La révision actuelle de la Directive Pratique est inspirée de:

 

Cette Directive a été définie par la Commission d’Anatomie Pathologique et a été déclarée contraignante et a donc un caractère législatif en application de l’Arrêté d’Agrément.

Les normes fixées dans la Directive Pratique et dans l’Arrêté d’agrément sont totalement analogues. Toute contradiction éventuelle entre cette Directive Pratique et une autre directive émanant d’une association scientifique représentative doit être soumise à la Commission d’Anatomie Pathologique. De manière hiérarchique, la Directive Pratique est subordonnée à l’Arrêté d’agrément, mais supérieure à la norme NBN ISO 15189.

À l’instar de tout système qualité, cette Directive Pratique est un document dynamique, qui peut être modifié et mis à jour au fil des modifications des exigences de qualité et de la réglementation.

Les laboratoires auront l’occasion de confronter la version actuelle de la Directive Pratique aux exigences de l’Arrêté d’agrément d’une part et à la réalité quotidienne d’autre part. Nous apprécierons de recevoir des remarques et des suggestions de votre part, afin que nous puissions en tenir compte dans une nouvelle version.

Vu le rôle de plus en plus important joué par les laboratoires d’anatomie pathologique dans le cadre du diagnostic et du traitement ciblé sur le patient, nous sommes convaincus que vous prendrez cette Directive Pratique à cœur, également par souci sincère de garantir la bonne qualité de vos services.

PB - Sciensano CY - Brussels, Belgium ER - TY - RPRT T1 - Praktijkrichtlijn voor het opzetten van een kwaliteitssysteem in de erkende laboratoria voor pathologische anatomie werkzaam binnen het kader van het Erkenningsbesluit Y1 - 2022 A1 - H. Verbeke KW - Kwaliteitssysteem KW - laboratorium voor pathologische anatomie AB -

In het Koninklijk Besluit van 5 december 2011 betreffende de erkenning van de laboratoria voor pathologische anatomie (verder het ‘Erkenningsbesluit’ genoemd) worden de kwaliteitsvereisten opgelijst waaraan een laboratorium voor pathologische anatomie dient te voldoen om erkend te kunnen worden en te blijven door de Minister tot wiens bevoegdheid de Volksgezondheid hoort.

Dit Erkenningsbesluit gelast de Commissie voor Pathologische Anatomie met het opstellen van een Praktijkrichtlijn, die als leidraad moet dienen voor laboratoria om een eigen kwaliteitshandboek op te stellen. Dit handboek beschrijft het kwaliteitssysteem van een individueel laboratorium, en heeft tot doel te komen tot een aantoonbare integrale kwaliteitsborging van de door de ziekteverzekering terugbetaalde onderzoeken (verstrekkingen) verricht in een laboratorium voor pathologische anatomie, werkzaam binnen het kader van het Erkenningsbesluit pathologische anatomie. Een kwaliteitssysteem is een systemisch en continu proces waarin alle laboratoriumwerkzaamheden beschreven, gedocumenteerd, geïmplementeerd en bewaakt worden.

Hoewel inherent “uniek” per laboratorium dient elk kwaliteitssysteem in een erkend laboratorium alle kwaliteitsvereisten zoals beschreven in het Erkenningsbesluit en in deze Praktijkrichtlijn na te leven. Deze vereisten dienen dus door elk individueel laboratorium naar de eigen praktijk ‘vertaald’ te worden. Hierbij wordt steeds rekening gehouden met het proportionaliteitsbeginsel of de evenredigheidsbeoordeling.  

De Praktijkrichtlijn moet in deze context dan ook in de eerste plaats worden gezien als een interpretatief hulpmiddel en niet-limitatieve checklist, en komt niet in de plaats van het Erkenningsbesluit zelf. Deze Praktijkrichtlijn dekt het volledig kwaliteitssysteem van pre-analytische fase tot post-analytische fase, i.e. instructies betreffende de aanvaarding van de stalen voor anatomo-pathologisch onderzoek vanaf de staalafname en ontvangst op het laboratorium tot de professionele adviesverlening over het verrichte onderzoek, de opstelling van het patiëntenverslag (protocol) en de transmissie ervan. Een effectief en efficiënt kwaliteitssysteem is essentieel om zodoende consistente, hoogwaardige en kosteneffectieve laboratoriumdiensten te kunnen aanbieden aan de clinici en de patiënten.  

In de analytische fase wordt het belang van verificatie en validatie benadrukt binnen het kader van de Europese Verordening 2017/746 van 5 april 2017 betreffende de medische hulpmiddelen voor In-Vitro Diagnostiek (IVDR). Volgens de IVDR (van toepassing met ingang op 26 mei 2022) mogen in de laboratoria alleen nog CE gelabelde IVD gebruikt worden én dit volgens de voorschriften of specificaties van de fabrikant (bijsluiter). Indien u hiervan afwijkt, wordt de test als ‘Laboratory Developed Test’ of LDT herklasseerd en onderworpen aan zwaardere validatie-opdrachten en strengere voorwaarden van de IVDR. Ondanks het feit de IVDR noch definitie van LDT geeft noch verder onderscheid maakt binnen LDT, werd in deze Prakrijkrichtlijn, op basis van de consensusresultaten van een risicoanalyse, LDT gecategoriseerd volgens het type (CE-IVD, gewijzigde CE-IVD of niet CE-IVD) van de test en de aan- of afwezigheid van een referentie. De validatie-opdrachten bij elke LDT categorie zijn het resultaat van een compromis tussen haalbaarheid, betaalbaarheid, de verplichtingen van de IVDR (art. 5.5) en patiëntveiligheid. De op risico gebaseerde categorisering van LDT en de bijhorende validatie-opdrachten die in deze Praktijkrichtlijn zijn uitgewerkt, zullen resulteren in een geobjectiveerde, nationaal uniforme, gestandaardiseerde en risico-analytisch & wetenschappelijk onderbouwde benadering voor het valideren van analytische testen en het aantonen van de analytische performantie ervan.

Artikel 5.5 van de IVDR vermeldt dat een niet CE-IVD alleen gebruikt mag worden (en vervaardigd op niet-industrieel niveau) wanneer niet op een passend prestatieniveau kan voldaan worden door een op de markt beschikbaar gelijkwaardig CE-IVD, en dit binnen een passend kwaliteitssysteem dat voldoet aan de norm ISO 15189 of in voorkomend geval aan de toepasselijke nationale bepalingen. Deze toepasselijke nationale bepalingen in het kader van de erkenning van laboratoria Pathologische Anatomie is de Praktijkrichtlijn.

Er werd bewust gekozen om de indeling van de internationaal erkende kwaliteitsnorm NBN EN ISO 15189:2012 als basis te gebruiken voor het opstellen van deze Praktijkrichtlijn. Alle erkende laboratoria voor pathologische anatomie hebben immers zonder meer belang bij een breed gedragen (ook internationale) erkenning van hun kwaliteitssysteem. Zo kan gerechtvaardigd vertrouwen gewonnen worden van belanghebbenden, en wordt op basis van een internationaal erkende systematiek gewerkt aan kwaliteitsborging en continue verbetering.

Deze keuze komt verder tegemoet aan de realiteit van meerdere laboratoria die reeds een kwaliteitssysteem volgens de internationale norm hebben geïmplementeerd, en biedt een goede ondersteuning voor die laboratoria die (op termijn) een ISO 15189-accreditatie nastreven. Het dient evenwel duidelijk te worden gesteld dat elk laboratorium een eigen kwaliteitssysteem gebaseerd op het Erkenningsbesluit en de bijhorende Praktijkrichtlijn dient te implementeren, waarop niet noodzakelijk alle hoofdstukken van de Praktijkrichtlijn van toepassing zijn. Er kan en er mag uiteraard worden afgeweken van de Praktijkrichtlijn middels een onderbouwde motivatie waarom, en idealiter gestaafd door een zelf uitgevoerde risicoanalyse. Voor zover alle norm-elementen van het Erkenningsbesluit en de Praktijkrichtlijn er in zijn opgenomen, kan elk laboratorium dus ook een eigen indeling voor het kwaliteitshandboek hanteren.

De norm NBN EN ISO 15189:2012 stelt duidelijke eisen, maar biedt door het ontbreken van toelichting op een aantal aspecten eigen aan pathologische anatomie, ruimte voor interpretatie en verwarring. De Praktijkrichtlijn is veel explicieter. In tegenstelling tot daar waar ISO 15189:2012 het systematisch nalaat van concreet toe te lichten wat precies verwacht wordt, en dus een vrij grote graad van vrijheid in interpretatie toestaat, wordt in de Praktijkrichtlijn wel heel concreet verduidelijkt hoe de normelementen kunnen worden ingevuld. Waar nodig werden ook richtlijnen vanuit internationale pathologie organisaties, bv. CAP (College of American Pathologists), geraadpleegd om deze aspecten nader toe te lichten, en werkbaar te interpreteren voor een laboratorium voor pathologische anatomie.

Er dient een duidelijk onderscheid te worden gemaakt tussen de erkenning van een laboratorium voor pathologische anatomie (door de Minister, volgens de vereisten van het Erkenningsbesluit) en een ISO-accreditatie (door BELAC, volgens de norm NBN EN ISO 15189). Dit onderscheid is belangrijk voor een correcte benadering en interpretatie van deze Praktijkrichtlijn, die immers enkel betrekking heeft op de erkenning van laboratoria en dus dient om te kunnen voldoen aan het Erkenningsbesluit pathologische anatomie.

De Praktijkrichtlijn vormt een leidraad voor de externe evaluaties door Sciensano en de Commissie voor Pathologische Anatomie met het oog op het verlenen en behoud van een erkenning. Het is belangrijk om te benadrukken dat een laboratorium voor pathologische anatomie als totaliteit geëvalueerd en erkend wordt en niet op specifieke onderdelen of op een beperkt aantal diagnostische testen (in tegenstelling tot de accreditatie). Tijdens visitaties die de voorbijgaande jaren door Sciensano werden uitgevoerd, werd vastgesteld dat bepaalde onderwerpen van de Praktijkrichtlijn onvoldoende werden uitgewerkt en toegelicht om zodoende een adequate toepassing ervan binnen het kwaliteitssysteem te kunnen garanderen. Omwille van deze redenen werd beslist om de Praktijkrichtlijn te reviseren en bepaalde hoofdstukken al dan niet volledig te herwerken en/of verder toe te lichten.

De huidige revisie van de Praktijkrichtlijn werd geïnspireerd door:

 

Deze Praktijkrichtlijn werd vastgelegd en bindend verklaard door de Commissie voor Pathologische Anatomie, en heeft in uitvoering van het Erkenningsbesluit derhalve een wetgevend karakter.  

De vereiste normen in de Praktijkrichtlijn en het Erkenningsbesluit zijn volledig gelijklopend. Elke eventuele tegenspraak tussen deze Praktijkrichtlijn en een andere richtlijn van representatieve wetenschappelijke verenigingen dient dan ook te worden voorgelegd aan de Commissie voor Pathologische Anatomie. Hiërarchisch is de Praktijkrichtlijn ondergeschikt aan het Erkenningsbesluit maar bovengeschikt aan de norm NBN ISO 15189.

Net zoals elk kwaliteitssysteem is ook deze Praktijkrichtlijn een dynamisch document, dat kan worden geamendeerd en geactualiseerd in het kader van wijzigende kwaliteitsvereisten en regelgevingen.

De huidige versie van de Praktijkrichtlijn zal door de laboratoria kunnen getoetst worden aan enerzijds de vereisten van het Erkenningsbesluit en anderzijds aan de realiteit van elke dag. Graag ontvangen wij uw opmerkingen en suggesties om deze te verwerken in een volgende versie.  

Met het oog op het toenemende belang van de laboratoria voor pathologische anatomie in het kader van patiënt-gebaseerde diagnostiek en therapie zijn wij er zeker van dat U, ook vanuit een oprechte bekommernis om de kwaliteit van dienstverlening, deze Praktijkrichtlijn ter harte zult nemen.

PB - Sciensano CY - Brussels, Belgium ER - TY - Generic T1 - Verificatie en validatie van analytische testen in labo AP Y1 - 2022 A1 - H. Verbeke ER - TY - Generic T1 - Validatie van testen: Een uitdaging in elk domein - Pathologie Y1 - 2021 A1 - H. Verbeke KW - pathologische anatomie KW - Validatie van testen PB - Sciensano CY - Brussels, Belgium ER - TY - JOUR T1 - Analytical validation of tests in laboratories of anatomic pathology: a Belgian population-based study JF - Accreditation and Quality Assurance Y1 - 2019 A1 - H. Verbeke A1 - AM. Dierick A1 - V Ghislain A1 - Wim Coucke A1 - Mohamed Rida Soumali KW - Laboratory of anatomic pathology · Test validation · Standard operating procedure · Validation report M3 - https://doi.org/10.1007/s00769-019-01418-3 ER - TY - Generic T1 - Bijkomende wettelijke vereisten Y1 - 2019 A1 - H. Verbeke KW - medische laboratoria JF - Workshop BELAC PB - Sciensano CY - Brussels, Belgium CP - BELAC ER - TY - RPRT T1 - Definitief globaal rapport documentaire audit – Validatie van onderzoeksmethoden – Enquête 2016/2 Y1 - 2018 A1 - H. Verbeke A1 - AM. Dierick ER - TY - RPRT T1 - Rapport global définitif audit documentaire - Validation des méthodes analytiques - Enquête 2016/2 Y1 - 2018 A1 - H. Verbeke A1 - AM. Dierick ER - TY - Generic T1 - Validatie van onderzoeksmethoden Y1 - 2018 A1 - H. Verbeke KW - pathologische anatomie KW - Validatie van analytische testen KW - validatierapport JF - De praktijkrichtlijn in de praktijk PB - Hannelien Verbeke CY - Aalst, België CP - Sciensano ER - TY - RPRT T1 - Definitief globaal rapport documentaire audit – Personeelsbeheer- Enquête 2016/1 Y1 - 2017 A1 - H. Verbeke A1 - AM. Dierick ER - TY - RPRT T1 - Rapport global définitif audit documentaire - Gestion du personnel - Enquête 2016/1 Y1 - 2017 A1 - H. Verbeke A1 - AM. Dierick ER - TY - RPRT T1 - Definitief jaarrapport – Implementatie artikelen 22, 24, 26, 27, 28 en 29 van het KB van 05/12/2011 – Enquête 2015 Y1 - 2016 A1 - H. Verbeke A1 - AM. Dierick ER - TY - RPRT T1 - Rapport annuel définitif - Implémentation des articles 22, 24, 26, 27, 28 et 29 de l'AR du 05/12/2011 - Enquête 2015 Y1 - 2016 A1 - H. Verbeke A1 - AM. Dierick ER - TY - Generic T1 - The use of the Olympus virtual slide system and PathXL software for EQA in Belgium : experiences of the IPH Y1 - 2016 A1 - H. Verbeke JF - EQALM 2016 symposium CP - EQALM ER - TY - Generic T1 - Acceptance sampling theory applied to EQA sample homogeneity testing Y1 - 2015 A1 - Wim Coucke A1 - C. Bernard A1 - M. Demarteau A1 - V Ghislain A1 - Yolande Lenga A1 - N.M. Vandevelde A1 - H. Verbeke A1 - C . Van Campenhout KW - EQA KW - meeting KW - Sample KW - sampling KW - TESTING JF - EQALM Meeting 2015 PB - NA CY - NA CP - EQALM, European Organisation For External Quality Assurance Providers in Laboratory Medicine U1 - 705 U2 - 8-9/10/2015 ER - TY - Generic T1 - Evolution of the implementation of a quality management system in the Belgian laboratories for anatomic pathology Y1 - 2015 A1 - H. Verbeke A1 - V Ghislain A1 - Wim Coucke A1 - C. Van Campenhout A1 - P Van de Walle AB -

Introduction

The Royal Decree (RD)  of the 5th December 2011, concerning the licenses of anatomic pathology laboratories came into force the 1th March 2013. The purpose of this RD is to monitor and guarantee the quality of the Belgian laboratories for anatomic pathology. Since the 1th March 2014 all Belgian anatomic pathology laboratories are licensed. Within the framework of this licensing the laboratories are obliged to elaborate a quality management system within five years.  However, the requirements concerning topics like access/safety and hygiene, maintenance and calibration of equipment, management of quality documents and method validation, transmission and confidentiality of patient reports, content of patient reports and management and validation of computerized systems  as stated in the articles 22, 24, 26, 27, 28 and 29 of the RD, respectively, should be fulfilled within a time period of three months counting from the entry into force of the license. Additionally, participation in the national external quality assessment program organized by the Belgian Scientific Institute of Public Health (IPH) is also required by law.

 

Aim

In order to follow up the implementation of the quality management system and the implementation of the articles 22, 24, 26, 27, 28 and 29 of the RD in the Belgian anatomic pathology laboratories,  a documentary audit by the department Quality of Medical Laboratories at the IPH has been performed.

 

Methods

In 2014, in collaboration with the Commission of Anatomic Pathology, all licensed laboratories were asked to fill out a table in which the percentages of implementation of each article (22/24/26/27/28/29) had to be indicated. In addition, the laboratories were requested to indicate for each item and article the corresponding Standard Operating Procedures (SOPs)  and validity  date.

In the course of 2015, during a second evaluation step, the laboratories were asked to actualize the table presented in the survey of 2014.  In addition, some specific quality documents were requested as well, in particular the patient reports and the SOPs concerning the management of the quality documents and on equipment management.

The tables, patient reports and SOPs were evaluated substantively for the presence of predefined items after which the percentage implementation for each article (only for the evaluation of the tables) and an overall score were calculated.

Results

From the installation of the RD till 2015, the number of licensed laboratories diminished from 102 in 2013 to 85 in 2015, mostly due to cessation of laboratories of connexists ( specialist physicians who perform acts of anatomic pathology exclusively for their own patients).

In 2014, 96 laboratories were included in the evaluation survey and 59 participants (61%) obtained an overall implementation score (all articles includes) of more than 70%.  During the second evaluation survey organized in 2015, among the 85 included laboratories, 77 (80%) received an overall implementation score of more than 70%.

In 2014 we counted 16 laboratories (16.6%) with an overall score of less than 25% as compared with 2015, in which no single laboratory scored less than 25%.

More detailed analysis of the obtained information revealed that the procedures on validation of methods and on management and validation of computerized systems seemed to be an issue. In 2014, only 56% of all laboratories had completely implemented the SOP on validation of methods, in contrast with 73% of the laboratories in 2015. In particular the implementation of article 29 (management and validation of computerized systems) seems to remain the biggest obstacle as only 30% of the laboratories had completely implemented this article in 2014 and still one third of all the laboratories are lacking this procedures in 2015.

 

Conclusions

The collaboration with the laboratories has contributed to the awareness of the laboratories to work in a quality environment. Close monitoring, adjustment and support by the IPH and the commission of anatomic pathology improved and is still improving the implementation of a quality management system as stated in the RD on licensing conditions of the Belgian laboratories for anatomic pathology.

JF - Belgian Week of pathology CP - Belgian Society of Pathology ER - TY - Generic T1 - First Belgian national EQA for special stains in histopathology Y1 - 2015 A1 - V Ghislain A1 - Egele,C. A1 - H. Verbeke A1 - Wim Coucke A1 - Michiels,J.F. A1 - Bellocq,JP A1 - Galant,C. A1 - Pauwels,P. A1 - M. Pétein A1 - Van den Heule,B. A1 - C . Van Campenhout AB -

In 2014, the first national survey for special stains in histopathology was organized by the Belgian ScientificInstitute of Public Health, in collaboration with the Commission of anatomic pathology. EQA programs havebecome imperative to give confidence in the quality of laboratory testing and to ensure delivery of consistentand accurate results that, ultimately, impact a patient diagnosis. They enable laboratories to evaluate theirperformance and methods compared with that of their peers or with the whole laboratory community.Participation is mandatory for Belgian licensed pathology laboratories and the goal of our programs is to beeducational rather than to be repressive. This abstract provides an insight into the first (2014) and the secondsurvey (2015) for special stains in histopathology.Aim:The two surveys aimed at assessing laboratory and method performance of the Belgian licensed pathologylaboratories. General quality of the slides (sectioning and coverslipping), of the hematoxylin and eosin (HE)stain and of four special stains (PAS, reticulin, trichrome and Perls), as submitted by the participants, wasevaluated. All laboratories were encouraged to process the samples within the laboratory's regular workloadof patient specimens, using their routine methods.Methods:A panel of two formalin-fixed and paraffin-embedded tissue samples, liver and kidney, was provided to eachparticipant, along with a request for sectioning and staining (HE, PAS and reticulin in 2014 and HE, PAS,reticulin, trichrome and Perls in 2015). Participants were surveyed for methodology and were instructed toreturn the stained slides within a two-week time frame. An expert panel of two pathologists evaluated thesubmitted slides for histologic technique using pre-established criteria. General quality of the slides andquality of each stain was assessed as optimal, good, borderline or poor. For each survey, an overall assessmentscore was generated which allowed us to compare all laboratories' performances. Since not all participantsroutinely perform all requested special stains, this overall assessment score was based upon slide quality andHE stain only. A general report including the encrypted results of all participants, individual comments,recommendations and assessment marks for staining methods was published. Following the first survey andprior to the next, follow-up on poor performing laboratories was conducted by the program organizers.Results:Ninety-one laboratories participated in the 2014 survey of which 73% achieved an excellent overall score.Eighty-eight laboratories participated in the 2015 survey of which 80% achieved an excellent overall score. In2014, the percentage of participants that achieved a satisfactory mark (optimal or good) for slide quality was80%, for the HE stain 90%, for the PAS stain 76% and for the reticulin stain 81%. In 2015, the percentage ofparticipants that achieved a satisfactory mark (optimal or good) for slide quality was 82%, for the HE stain97%, for the PAS stain 82%, for the reticulin stain 76%, for the trichrome stain 72% and for the Perls stain92%. A statistically significant difference between results obtained with manual vs. automated stainingmethods was observed.Conclusions:These surveys assessed the laboratory and method performance of the Belgian pathology laboratoriescurrently licensed for routinely performing histopathological stains. The results suggest that the vast majorityof the Belgian laboratories are able to provide good quality histopathological stains. Moreover, differencesbetween staining methods were observed. By providing a general report with individual comments and followupon poor performances, the program aims at stimulating the participants to adopt proper practices forhistopathological stains and hence improving their quality.

JF - Belgian Week of Pathology PB - NA CY - NA CP - UGent U1 - 710 U2 - 21-24/10/2015 ER - TY - Generic T1 - Solution powered by PathXL in the context of the External Quality Assessments in Belgium Y1 - 2015 A1 - H. Verbeke JF - PathXL user group meeting PB - NA CY - NA CP - PathXL U1 - 868 U2 - 16/04/2015 ER - TY - Generic T1 - Stand van zaken erkenningen en nationaal EKE programma Y1 - 2015 A1 - H. Verbeke A1 - V Ghislain JF - Symposium coupe-rondzending PB - NA CY - NA CP - OLV Ziekenhuis Aalst U1 - 869 U2 - 29/05/2015 ER - TY - Generic T1 - Directive Pratique pour la mise en place d’un système qualité dans les laboratoires d’anatomie pathologique agréés dans le cadre de l’Arrêté d’agrément Y1 - 2014 A1 - H. Verbeke AB -

L’Arrêté Royal du 5 décembre 2011 concernant l’agrément des laboratoires d’anatomie pathologique (ci-dessous « l’Arrêté d’agrément ») liste les exigences de qualité auxquelles un laboratoire d’anatomie pathologique doit satisfaire pour pouvoir être agréé par le Ministre qui a la Santé publique dans ses attributions.

L’Arrêté d’agrément délègue à la Commission d’Anatomie Pathologique la rédaction de Directives Pratiques, qui doivent aider les laboratoires à établir leur propre manuel qualité. Ce manuel décrit le système qualité d’un laboratoire et a pour objectif de pouvoir démontrer la qualité de toutes les analyses du laboratoire d’anatomie pathologique réalisées dans le cadre de l’Arrêté d’agrément.

Bien que, par essence, ‘unique’ pour chaque laboratoire, le système qualité d’un laboratoire agréé doit répondre à toutes les exigences de qualité reprises dans l’Arrêté d’agrément. Ces exigences doivent donc être mises en pratique dans chaque laboratoire.

Dans ce contexte, la Directive Pratique doit donc être comprise en premier lieu comme un ensemble interprétatif et non-limitatif de conseils et ne remplace en aucun cas l’Arrêté d’agrément lui-même. La Directive Pratique concerne la totalité du système qualité, de la phase pré-analytique à la phase post-analytique, et reprend donc toutes les instructions en rapport avec l’analyse anatomo-pathologique d’un échantillon, depuis son prélèvement et sa réception au laboratoire jusqu’à l’élaboration professionnelle d’un avis sur l’analyse prescrite, la rédaction d’un compte rendu et sa transmission.

Cette Directive Pratique peut être considérée comme un fil conducteur pour les évaluations externes réalisées par l’ISP et par la Commission d’Anatomie Pathologique en vue d’octroyer un agrément. Toutefois, les exigences de l’Arrêté d’agrément restent la base des évaluations. Il faut donc insister sur le fait qu’un laboratoire d’anatomie pathologique est évalué et agréé dans sa totalité et non sur la base d’éléments spécifiques ou d’une offre limitée de tests diagnostiques.

Il convient de distinguer clairement l’agrément d’un laboratoire d’anatomie pathologique (par le Ministre, suivant les exigences de l’Arrêté d’agrément) de l’accréditation ISO (par BELAC, suivant la norme NBN EN ISO 15189). Cette distinction est essentielle pour une approche et une interprétation correctes de la Directive Pratique qui ne concerne que l’agrément des laboratoires et qui peut être utilisée pour satisfaire aux exigences de l’Arrêté d’agrément.

La Directive Pratique est inspirée de:

 

Nous avons délibérément choisi d’utiliser la norme de qualité internationalement reconnue NBN EN ISO 15189:2012 comme base d’élaboration de cette Directive Pratique. Tous les laboratoires d'anatomie pathologique agréés ont en effet intérêt à obtenir un agrément élargi (y compris sur la scène internationale) de leur système qualité. Ce système qualité agréé permet de gagner la confiance légitime des intéressés et de développer une systématique reconnue internationalement en termes d’assurance qualité et d’amélioration continue.

Ce choix vise également à rencontrer la réalité de laboratoires de plus en plus nombreux qui ont implémenté un système  qualité suivant des normes internationales, et offre un bon fondement aux laboratoires visant à une accréditation ISO 15189 (à terme). Il est également évident que chaque laboratoire doit implémenter son propre système qualité basé sur l’Arrêté d’agrément, dans lequel tous les chapitres de la Directive Pratique ne doivent pas nécessairement être d’application. Chaque laboratoire peut également implémenter un classement original du manuel qualité, pour autant que tous les éléments de la norme repris dans l’Arrêté d’agrément soient intégrés.

La norme NBN EN ISO 15189:2012 fixe des exigences claires – et est parfois même plus explicite que la présente Directive Pratique – mais, du fait du manque d’explications concernant une série d’aspects propres à l’anatomie pathologique, elle laisse une plus grande marge d’interprétation que cette Directive Pratique. Quand la situation l’exigeait, nous avons également consulté les directives d’organisations de pathologie internationales telles que le CAP (College of American Pathologists) afin d’encore clarifier ces aspects et de les interpréter pour les adapter à la réalité des laboratoires d’anatomie pathologique.

Cette Directive a été définie par la Commission d’Anatomie Pathologique et a été déclarée contraignante.

Les normes fixées dans la Directive Pratique et dans l’Arrêté d’agrément sont totalement analogues. Toute contradiction éventuelle entre cette Directive Pratique et une autre directive émanant d’une association scientifique représentative doit être soumise au groupe de travail « Directive Pratique » de la Commission d’Anatomie Pathologique.

À l’instar de tout système qualité, cette Directive Pratique est un document dynamique, qui peut être modifié et mis à jour au fil des modifications des exigences de qualité.

Les laboratoires auront l’occasion de confronter la version actuelle de la Directive Pratique aux exigences de l’Arrêté d’agrément d’une part et à la réalité quotidienne d’autre part. Nous apprécierons de recevoir des remarques et des suggestions de votre part, afin que nous puissions en tenir compte dans une nouvelle version. Sur la base de vos remarques et suggestions, la Directive Pratique sera révisée annuellement.

Vu le rôle de plus en plus important joué par les laboratoires d’anatomie pathologique dans le cadre du diagnostic et du traitement ciblés sur le patient, nous sommes convaincus que vous prendrez cette Directive Pratique à cœur, également par souci sincère de garantir la bonne qualité de vos services.

Dr. R. Salgado, Président du groupe de travail “Directive Pratique”

Dr. K. Cokelaere, Président de la Commission d’Anatomie Pathologique

 

ER - TY - JOUR T1 - Antitumoral activity of parvovirus-mediated IL-2 and MCP-3/CCL7 delivery into human pancreatic cancer: implication of leucocyte recruitment JF - Cancer Immunol Immunother Y1 - 2012 A1 - S. Dempe A1 - M. Lavie A1 - S. Struyf A1 - R. Bhat A1 - H. Verbeke A1 - S. Paschek A1 - N. Berghmans A1 - R. Geibig A1 - J. Rommelaere A1 - J. Van Damme A1 - C. Dinsart KW - chemokine KW - IL-2 KW - Pancreatic carcinoma KW - Parvovirus AB -

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) represents the fourth leading cause of cancer-related death in western countries. The patients are often diagnosed in advanced metastatic stages, and the prognosis remains extremely poor with an overall 5-year survival rate less than 5 %. Currently, novel therapeutic strategies are being pursued to combat PDAC, including oncolytic viruses, either in their natural forms or armed with immunostimulatory molecules. Natural killer cells are critical players against tumours and infected cells. Recently, we showed that IL-2-activated human NK cells displayed killing activity against PDAC cells, which could further be enhanced through the infection of PDAC cells with the rodent parvovirus H-1PV. In this study, the therapeutic efficacy of parvovirus-mediated delivery of three distinct cyto/chemokines (Il-2, MCP-3/CCL7 and IP-10/CXCL10) was evaluated in xenograft models of human PDAC. We show here that activated NK and monocytic cells were found to be recruited by PDAC tumours upon infection with parvoviruses armed with IL-2 or the chemokine MCP-3/CCL7, resulting in a strong anti-tumour response.

VL - 61 CP - 11 M3 - 10.1007/s00262-012-1279-4 ER - TY - JOUR T1 - The role of CXC chemokines in the transition of chronic inflammation to esophageal and gastric cancer JF - Biochim Biophys Acta Y1 - 2012 A1 - H. Verbeke A1 - K. Geboes A1 - J. Van Damme A1 - S. Struyf KW - Chemokines KW - CXC KW - Esophageal Neoplasms KW - Esophagitis KW - Gastritis KW - Humans KW - Stomach Neoplasms AB -

Chronic inflammation may increase the risk to develop cancer, for instance esophagitis or gastritis may lead to development of esophageal or gastric cancer, respectively. The key molecules attracting leukocytes to local inflammatory sites are chemokines. We here provide a systematic review on the impact of CXC chemokines (binding the receptors CXCR1, CXCR2, CXCR3 and CXCR4) on the transition of chronic inflammation in the upper gastrointestinal tract to neoplasia. CXCR2 ligands, including GRO-α,β,γ/CXCL1,2,3, ENA-78/CXCL5 and IL-8/CXCL8 chemoattract pro-tumoral neutrophils. In addition, angiogenic CXCR2 ligands stimulate the formation of new blood vessels, facilitating tumor progression. The CXCR4 ligand SDF-1/CXCL12 also promotes tumor development by stimulating angiogenesis and by favoring metastasis of CXCR4-positive tumor cells to distant organs producing SDF-1/CXCL12. Furthermore, these angiogenic chemokines also directly enhance tumor cell survival and proliferation. In contrast, the CXCR3 ligands Mig/CXCL9, IP-10/CXCL10 and I-TAC/CXCL11 are angiostatic and attract anti-tumoral T lymphocytes and may therefore mediate tumor growth retardation and regression. Thus, chemokines exert diverging, sometimes dual roles in tumor biology as described for esophageal and gastric cancer. Therefore extensive research is needed to completely unravel the complex chemokine code in specific cancers. Possibly, chemokine-targeted cancer therapy will have to be adapted to the individual's chemokine profile.

VL - 1825 CP - 1 M3 - 10.1016/j.bbcan.2011.10.008 ER - TY - Generic T1 - Royal Decree (RD) concerning the licenses of anatomic pathology laboratories Y1 - 2012 A1 - H. Verbeke JF - Quality in the Spotlight Conference ER - TY - Generic T1 - Taken en werking WIV binnen het kader van het erkenningsbesluit van laboratoria pathologische anatomie Y1 - 2012 A1 - H. Verbeke JF - Recognition of pathology laboratories in Belgium CP - Belgische beroepsvereniging der geneesheren specialisten in pathologische anatomie ER - TY - JOUR T1 - Circulating bone-marrow-derived endothelial precursor cells contribute to neovascularization in diabetic epiretinal membranes JF - Acta Ophthalmol. Y1 - 2011 A1 - A.M. Abu El-Asrar A1 - Struyf,S. A1 - H. Verbeke A1 - J. Van Damme A1 - Geboes,K. KW - Diabetic Retinopathy KW - endothelial progenitor cells KW - Monocytes KW - stromal cell-derivedfactor-1 KW - vasculogenesis AB -

PURPOSE: The role of vasculogenesis, recruitment and differentiation of circulating bone-marrow-derived endothelial precursor cells into mature endothelium in proliferative diabetic retinopathy (PDR) remains undefined. We investigated the presence of bone-marrow-derived endothelial precursor cells and the expression of the chemotactic pathway SDF-1 CXCL12)CXCR4 in PDR epiretinal membranes. METHODS: Membranes from eight patients with active PDR and nine patients with inactive PDR were studied by immunohistochemistry using antibodies against CD133, vascular endothelial growth factor receptor-2 (VEGFR-2), CD14, SDF-1 and CXCR4. RESULTS: Blood vessels expressed CD133, VEGFR-2, CD14, SDF-1 and CXCR4 in 10, 10, 10, seven and seven out of 17 membranes, respectively. There were significant correlations between number of blood vessels expressing CD34 and number of blood vessels expressing CD133 (r(s) = 0.646; p = 0.005), VEGFR-2 (r(s) = 0.704; p = 0.002), CD14 (r(s) = 0.564; p = 0.018) and SDF-1 (r(s) = 0.577; p = 0.015). Stromal cells in close association with blood vessels expressed CD133, VEGFR-2, CD14 and CXCR4 in 10, 12, 13 and 14 membranes, respectively. The number of blood vessels expressing CD133 (p = 0.013), VEGFR-2 (p = 0.005), CD14 (p = 0.008) and SDF-1 (p = 0.005), and stromal cells expressing CD133 (p = 0.003), VEGFR-2 (p = 0.013) and CD14 (p = 0.002) was significantly higher in active membranes than in inactive membranes. CONCLUSION: Bone-marrow-derived CD133(+) endothelial progenitor cells and CD14(+) monocytes may contribute to vasculogenesis in PDR

VL - 89 CP - 3 U1 - 38482 M3 - AOS1700 [pii];10.1111/j.1755-3768.2009.01700.x [doi] ER - TY - JOUR T1 - The expression and role of CXC chemokines in colorectal cancer JF - Cytokine Growth Factor Rev. Y1 - 2011 A1 - H. Verbeke A1 - Struyf,S. A1 - Laureys,G. A1 - J. Van Damme KW - angiogenesis KW - chemokine KW - colorectal cancer KW - Leukocyte AB -

Cancer is a life-threatening disease world-wide and colorectal cancer is the second common cause of cancer mortality. The interaction between tumor cells and stromal cells plays a crucial role in tumor initiation and progression and is partially mediated by chemokines. Chemokines predominantly participate in the chemoattraction of leukocytes to inflammatory sites. Nowadays, it is clear that CXC chemokines and their receptors (CXCR) may also modulate tumor behavior by several important mechanisms: regulation of angiogenesis, activation of a tumor-specific immune response by attracting leukocytes, stimulation of tumor cell proliferation and metastasis. Here, we review the expression and complex roles of CXC chemokines (CXCL1 to CXCL16) and their receptors (CXCR1 to CXCR6) in colorectal cancer. Overall, increased expression levels of CXC chemokines correlate with poor prognosis

VL - 22 CP - 5-6 U1 - 39046 M3 - S1359-6101(11)00044-X [pii];10.1016/j.cytogfr.2011.09.002 [doi] ER - TY - JOUR T1 - Isotypic neutralizing antibodies against mouse GCP-2/CXCL6 inhibit melanoma growth and metastasis JF - Cancer Lett. Y1 - 2011 A1 - H. Verbeke A1 - Struyf,S. A1 - Berghmans,N. A1 - E. Van Coillie A1 - Opdenakker,G. A1 - Uyttenhove,C. A1 - J. Van Snick A1 - J. Van Damme KW - )Melanoma KW - chemokine KW - Granulocyte chemotactic protein-2 (GCP-2 AB -

The chemokine granulocyte chemotactic protein (GCP)-2/CXCL6 promotes tumor growth as angiogenesis inducer and neutrophil chemoattractant. The neutralizing capacity and specificity of monoclonal mouse anti-murine (mu)GCP-2/CXCL6 antibodies were evidenced by granulocyte chemotaxis and signaling assays. The half-life of the non-antigenic antibody in the blood circulation was approximately 15 days. The titers remained constant upon weekly injection. Tumor growth and lymphogenic metastases of human melanoma over-expressing muGCP-2 were reduced in mice treated with anti-muGCP-2. Moreover, the drop in muGCP-2 antibody titer correlated with the melanoma tumor size. Taken together, we show that functional blocking of GCP-2 inhibits tumor growth and metastases

VL - 302 CP - 1 U1 - 39045 M3 - S0304-3835(10)00576-8 [pii];10.1016/j.canlet.2010.12.013 [doi] ER - TY - JOUR T1 - Expression of angiostatic platelet factor-4var/CXCL4L1 counterbalances angiogenic impulses of vascular endothelial growth factor, interleukin-8/CXCL8, and stromal cell-derived factor 1/CXCL12 in esophageal and colorectal cancer JF - Hum.Pathol. Y1 - 2010 A1 - H. Verbeke A1 - G. De Hertogh A1 - Li,S. A1 - Vandercappellen,J. A1 - Noppen,S. A1 - Schutyser,E. A1 - El-Asrar,A.A. A1 - Opdenakker,G. A1 - J. Van Damme A1 - Geboes,K. A1 - Struyf,S. KW - Adenocarcinoma of the esophagus KW - angiogenesis KW - chemokine KW - Colorectal adenocarcinoma KW - Squamous cell carcinoma of the esophagus AB -

Chemokines influence tumor progression through regulation of leukocyte chemotaxis, angiogenesis, and metastasis. In this study, the regulated expression of angiogenic (stromal cell-derived factor [SDF]-1/CXCL12 and interleukin [IL]-8/CXCL8) and angiostatic (platelet factor [PF]-4var/CXCL4L1 and inducible protein [IP-10]/CXCL10) chemokines was examined in human colorectal and esophageal cancer. In HCT 116 and HCT-8 colorectal adenocarcinoma cells, the production of IL-8 immunoreactivity was up-regulated by IL-1beta, tumor necrosis factor (TNF)-alpha, the toll-like receptor (TLR) ligands double-stranded RNA and peptidoglycan and phorbol ester. Increased PF-4 and synergistic IL-8 and IP-10 induction in carcinoma cells after stimulation with IL-1beta plus TNF-alpha or interferon-gamma was demonstrated by enzyme-linked immunosorbent assay, quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction, or immunocytochemistry. In addition, IL-8 from HT-29 colorectal adenocarcinoma cells was molecularly identified as intact chemokine, as well as NH(2)-terminally truncated, more active IL-8(6-77). The presence of PF-4var, SDF-1, and vascular endothelial growth factor (VEGF) was evidenced by immunohistochemistry in surgical samples from 51 patients operated on for colon adenocarcinoma (AC), esophageal AC, or esophageal squamous cell carcinoma (SCC). PF-4var was strongly detected in colorectal cancer, whereas its expression in esophageal cancer was rather weak. Staining for SDF-1 was almost negative in esophageal SCC, whereas a more intense and frequent staining was observed in AC of the esophagus and colon. Staining for VEGF was moderately to strongly positive in all 3 types of cancer, although less prominent in esophageal AC. The heterogenous expression of angiogenic (IL-8, SDF-1) as well as angiostatic (IP-10, PF-4var) chemokines not only within the tumor and between the different cases but also between the different tumor cell types may indicate a distinct role of the various chemokines in the complex process of tumor development

VL - 41 CP - 7 U1 - 39044 M3 - S0046-8177(09)00463-8 [pii];10.1016/j.humpath.2009.09.021 [doi] ER - TY - JOUR T1 - CC chemokine ligand-2 synergizes with the nonchemokine G protein-coupled receptor ligand fMLP in monocyte chemotaxis, and it cooperates with the TLR ligand LPS via induction of CXCL8 JF - J.Leukoc.Biol. Y1 - 2009 A1 - Gouwy,M. A1 - Struyf,S. A1 - H. Verbeke A1 - Put,W. A1 - Proost,P. A1 - Opdenakker,G. A1 - J. Van Damme KW - chemokine KW - chemotaxis KW - cytokine KW - monocyte KW - neutrophile AB -

During inflammatory reactions, endogenously produced cytokines and chemokines act in a network and interact with hormones and neurotransmitters to regulate host immune responses. These signaling circuitries are even more interfaced during infections, when microbial agonists activate TLR, RLR, and NLR receptors. On the basis of the discovery of synergy between chemokines for neutrophil attraction, we extend here this phenomenon between the chemokine MCP-1/CCL2 and the GPCR ligand fMLP or the TLR4 agonist LPS on monocytes. In fact, the bacterial tripeptide fMLP, but not the cytokines IL-1beta or IFN-gamma, significantly and dose-dependently synergized with CCL2 in monocyte chemotaxis. Furthermore, LPS rapidly induced the expression of IL-8/CXCL8 but not of the CCL2 receptor CCR2 in monocytic cells. In turn, the induced CXCL8 synergized with CCL2 for mononuclear cell chemotaxis, and the chemotactic effect was mediated by CXCR1/CXCR2, because CXCL8 receptor antagonists or antibodies were capable of blocking the synergy, while keeping the responsiveness to CCL2 intact. These data recapitulate in vitro the complexity of innate immune regulation, provide a novel mechanism of enhancing monocyte chemotaxis during bacterial infections with gram-negative bacteria and demonstrate the importance of local contexts in inflammatory and infectious insults

VL - 86 CP - 3 U1 - 38748 M3 - jlb.1008638 [pii];10.1189/jlb.1008638 [doi] ER - TY - JOUR T1 - Citrullination of CXCL12 differentially reduces CXCR4 and CXCR7 binding with loss of inflammatory and anti-HIV-1 activity via CXCR4 JF - J.Immunol. Y1 - 2009 A1 - Struyf,S. A1 - Noppen,S. A1 - Loos,T. A1 - Mortier,A. A1 - Gouwy,M. A1 - H. Verbeke A1 - Huskens,D. A1 - Luangsay,S. A1 - Parmentier,M. A1 - Geboes,K. A1 - Schols,D. A1 - J. Van Damme A1 - Proost,P. KW - chemokine KW - citrullination AB -

Posttranslational proteolytic processing of chemokines is a natural mechanism to regulate inflammation. In this study, we describe modification of the CXC chemokine stromal cell-derived factor 1alpha/CXCL12 by peptidylarginine deiminase (PAD) that converts arginine residues into citrulline (Cit), thereby reducing the number of positive charges. The three NH(2)-terminal arginines of CXCL12, Arg(8), Arg(12), and Arg(20), were citrullinated upon incubation with PAD. The physiologic relevance of citrullination was demonstrated by showing coexpression of CXCL12 and PAD in Crohn's disease. Three CXCL12 isoforms were synthesized for biologic characterization: CXCL12-1Cit, CXCL12-3Cit, and CXCL12-5Cit, in which Arg(8), Arg(8)/Arg(12)/Arg(20), or all five arginines were citrullinated, respectively. Replacement of only Arg(8) caused already impaired (30-fold reduction) CXCR4 binding and signaling (calcium mobilization, phosphorylation of ERK and protein kinase B) properties. Interaction with CXCR4 was completely abolished for CXCL12-3Cit and CXCL12-5Cit. However, the CXCR7-binding capacities of CXCL12-1Cit and CXCL12-3Cit were, respectively, intact and reduced, whereas CXCL12-5Cit failed to bind CXCR7. In chemotaxis assays with lymphocytes and monocytes, CXCL12-3Cit and CXCL12-5Cit were completely devoid of activity, whereas CXCL12-1Cit, albeit at higher concentrations than CXCL12, induced migration. The antiviral potency of CXCL12-1Cit was reduced compared with CXCL12 and CXCL12-3Cit and CXCL12-5Cit (maximal dose 200 nM) could not inhibit infection of lymphocytic MT-4 cells with the HIV-1 strains NL4.3 and HE. In conclusion, modification of CXCL12 by one Cit severely impaired the CXCR4-mediated biologic effects of this chemokine and maximally citrullinated CXCL12 was inactive. Therefore, PAD is a potent physiologic down-regulator of CXCL12 function

VL - 182 CP - 1 U1 - 38882 M3 - 182/1/666 [pii] ER - TY - JOUR T1 - Interleukin-17 regulates chemokine and gelatinase B expression in fibroblasts to recruit both neutrophils and monocytes JF - Immunobiology Y1 - 2009 A1 - Qiu,Z. A1 - Dillen,C. A1 - Hu,J. A1 - H. Verbeke A1 - Struyf,S. A1 - J. Van Damme A1 - Opdenakker,G. KW - chemokine KW - Fibroblast KW - Interleukin-17 KW - Matrix metalloproteinase KW - Monocyte chemotactic protein-1 KW - Tissue inhibitor of metalloprotease AB -

Interleukin 17 (IL-17) is a proinflammatory cytokine, produced only by activated lymphocytes, but with a broad cellular host range. The effects of IL-17 on fibroblasts were investigated by analysis of the induction of chemokine and matrix metalloprotease (MMP) mRNA levels by RT-PCR. IL-17 stimulated CC chemokine (monocyte chemotactic protein-1; MCP-1/JE) and CXC (KC, MIP-2) chemokine and TIMP-1 mRNA expression in fibroblastoid L929 cells. In normal mouse embryonic fibroblasts (MEF) this induction profile by IL-17 was extended with the mRNAs encoding the chemokine granulocyte chemotactic protein-2 (GCP-2) and the proteases MMP-3, MMP-9 and MMP-13. The MMP-9 and GCP-2 induction by IL-17 in MEF, and the absence of induction in L929 cells, were corroborated by gelatin zymography and ELISA, respectively. The induction of MCP-1/CCL2 by IL-17 was confirmed in human diploid fibroblasts. We conclude that IL-17 regulates differentially chemokine and MMP expression by normal and transformed fibroblasts and is indirectly capable of attracting both monocytes and neutrophils to the inflammatory focus

VL - 214 CP - 9-10 U1 - 38862 M3 - S0171-2985(09)00112-0 [pii];10.1016/j.imbio.2009.06.007 [doi] ER - TY - JOUR T1 - Stimulation of angiostatic platelet factor-4 variant (CXCL4L1/PF-4var) versus inhibition of angiogenic granulocyte chemotactic protein-2 (CXCL6/GCP-2) in normal and tumoral mesenchymal cells JF - J.Leukoc.Biol. Y1 - 2007 A1 - Vandercappellen,J. A1 - Noppen,S. A1 - H. Verbeke A1 - Put,W. A1 - Conings,R. A1 - Gouwy,M. A1 - Schutyser,E. A1 - Proost,P. A1 - Sciot,R. A1 - Geboes,K. A1 - Opdenakker,G. A1 - J. Van Damme A1 - Struyf,S. KW - angiogenesis KW - chemokine KW - cytokine KW - Monocytes AB -

Chemokines affect inflammation and cancer through leukocyte attraction and angiogenesis. Here, we demonstrate that CXCL4L1/platelet factor-4 variant (PF-4var), a highly angiostatic chemokine, is poorly chemotactic for phagocytes and is inducible in monocytes by inflammatory mediators but remained undetectable in macrophages and neutrophils. In addition, CXCL4L1/PF-4var production by mesenchymal tumor cells was evidenced in vitro and in vivo by specific ELISA and immunohistochemistry. CXCL4L1/PF-4var, but not CXCL4/PF-4, was coinduced with the angiogenic chemokine CXCL6/granulocyte chemotactic protein-2 (GCP-2) by cytokines, e.g., IL-1beta and IL-17, in sarcoma cells, but not in diploid fibroblasts. Furthermore, the induction of CXCL6/GCP-2 in endothelial cells by IL-1beta was enhanced synergistically by TNF-alpha but inhibited by IFN-gamma, which synergized with IL-1beta to produce the angiostatic CXCL10/IFN-gamma-induced protein-10. These findings indicate that the equilibrium between angiostatic and angiogenic factors during inflammation and tumor progression is rather complex and differs depending on the chemokine, cell type, and stimulus. Selective intervention in the chemokine network may drastically disturb this delicate balance of angiogenesis and tissue repair. Application of angiostatic CXCL4L1/PF-4var without attraction of protumoral phagocytes may be beneficial in cancer therapy

VL - 82 CP - 6 U1 - 39041 M3 - jlb.0407206 [pii];10.1189/jlb.0407206 [doi] ER - TY - RPRT T1 - Belgian recommendations for analytical verification and validation of immunohistochemical tests in laboratories of anatomic pathology Y1 - 0 A1 - H. Verbeke ED - D. Van Hecke ER -