PCR - Genen coderend voor TDH- en TRH-hemolysinen van Vibrio parahaemolyticus

Last updated on 1-2-2023 by Amber Van Laer

Description

Sommige isolaten van Vibrio parahaemolyticus (V. parahaemolyticus) produceren twee hemolysinen: hittestabiel direct hemolysine (TDH) en hittestabiel direct hemolysine-gerelateerd hemolysine dat direct hittelabiel hemolysine (TRH) is. De expressie van deze hemolysinen is een virulentiefactor voor de species V. parahaemolyticus. Ze hebben inderdaad lytische, cytotoxische en enterotoxische activiteiten. In de natuurlijke omgeving zijn stammen die genen dragen die coderen voor hemolysinen zeldzaam, terwijl deze genen over het algemeen aanwezig zijn in stammen geïsoleerd uit de ontlasting van patiënten die lijden aan gastro-enteritis. Ook is het zoeken naar pathogeniteit door het detecteren van de genen die coderen voor deze hemolysinen noodzakelijk. Een duplex PCR is ontwikkeld door Kaysner et al. 1999 en wordt toegepast op het referentiecentrum om de pathogeniteit van stammen van V. parahaemolyticus te beoordelen.

Doel van de test

Detectie van hemolysinen TDH en TRH, virulentiefactoren van V. parahaemolyticus.

Criteria voor het uitvoeren van deze test in het kader van de referentie activiteiten.

Elke stam van Vibrio ontving en bevestigde V. parahaemolyticus door het NRC en werd geïsoleerd uit humane stalen. 

Instructies voor monsters

Van een cultuur van de stam van V. parahaemolyticus die moet worden verzonden, bereiding van een verse en zuivere subcultuur op een voedingsbodem en verzending eenderzijds op een agarplaat, of na massale enting in de diepte in een voedingsagar in buis of op een wattenstaafje in het transportmedium na het oogsten van de subcultuur.

Instructies voor het transport

  • De stam moet verpakt zijn in een geschikt transportmedium (agardoos of -buisje, wattenstaafje met transportmedium) en correct geïdentificeerd zijn.
  • Transport in driedubbele verpakking:
    • Goed afgesloten blikken en tubes;
    • Verpakking met adsorberend materiaal in secundaire verpakking (doos van het type „transportblister”, plastic bakjes of plastic zak met ritssluiting);
    • Alles vervolgens in een gewatteerde envelop of doos geplaatst.
  • Zo snel mogelijk op kamertemperatuur, binnen 72 uur na bereiding
  • Etikettering en transportvoorwaarden in overeenstemming met de geldende regelgeving met betrekking tot besmettelijk materiaal.
  • Voor elke stam moet het aanvraagformulier (te downloaden van de NRCHM website) zo gedetailleerd mogelijk worden ingevuld en bij elke verzonden stam worden gevoegd.

Onaanvaardbare aanvragen

De volgende criteria worden gebruikt om een ​​staal af te wijzen:

  • Niet-geïdentificeerd staal,
  • Onvolledig aanvraagformulier
  • Duidelijke ongepaste opslag- of transportomstandigheden
  • Identificatie van V. parahaemolyticus niet bevestigd.

Turn around time (en de frequentie van analyse)

  • Frequentie van de analyse: Op aanvraag.
  • Tijd voor detectie: 48 uur.
  • Dagen van analyse: Elke werkdag van maandag tot vrijdag.

Rapportering van testresultaten

  • Hoe: telefonische communicatie (1) en papieren melding per post (2) of elektronische melding (3).
  • Wanneer: wanneer relevante analyseresultaten (ook gedeeltelijk) bekend zijn (telefoon, e-mail: 1 of 3), wanneer alle analyseresultaten bekend zijn (schriftelijk rapport: 2 of 3).
  • Samenvatting van alle resultaten beschikbaar in het jaarverslag.

Accreditatie

Is the analysis accredited?

Materials and methods

Material(s): 
Method reference: 
-

Analysis categories

Medical

QR code

QR code for this page URL