Description du test
Le test consiste:
- à rechercher les toxines dans les selles ou sur culture par tests immuno-enzymatique.
- à évaluer le pouvoir toxinogène de C.difficile par effet cytopathogène sur culture cellulaire.
- à détecter simultanément, par une multiplex, les gènes de la toxine B (tcdB), de la toxine A (tcdA), de la toxine binaire (cdtA et cdtB) et de les délétions de 18pb, 39pb et 54pb dans le gène de régulation tcdC.
But du test
Le principal facteur de virulence de C.difficile est la cytotoxine B. La plupart des souches pathogènes sont positives à la toxine A et à la toxine B (A+B+) ou plus rarement négatifs à la toxine A et positifs à la toxine B (A-B+). Un nombre restreint de souches de C.difficile produisent également une toxine binaire. Le locus de la toxine binaire contient deux gènes distincts (cdtA et cdtB). Chez les souches hypervirulentes comme les souches 027/NAP1/BI, on peut démontrer en plus des gènes de la toxine A&B et de la toxine binaire, des mutations sur le gène de régulation négative de la toxine (tcdC), notamment une délétion de 18pb et d’un nucléotide en position 117. Ces dernières influenceraient la quantité de toxines que la souche peut produire.
Critères pour effectuer ce test dans le cadre des activités de référence.
APRES AVOIR PRIS CONTACT AVEC LE LABORATOIRE
Instructions pour les échantillons
La souche doit être en culture pure. Elle doit être fraîchement ensemencée sur un milieu approprié. Milieux recommandés : gélose profonde, boîte au sang sous sachet de type Anaerogen Compact (Oxoid), Anaerocult p (Merck) ou système similaire, milieux préréduits, thioglycolate ou tubes genre « port a cul ». Bien qu’il soit recommandé d’envoyer des cultures, le CNR accepte également l’envoi d’échantillons de selles.
Instructions pour le transport
- Le transport se fait de préférence dans des conditions d’anaérobiose. Transport à température ambiante si l’échantillon arrive au labo dans les 6 heures qui suivent le prélèvement ou réfrigéré dans un délai inférieur à 72 heures (dépassé ce délai, les selles peuvent être congelées à -20°C). Veiller à bien fermer les tubes pour éviter les “fuites”; à cette fin vous pouvez envelopper le tube bouché dans du parafilm.
- L’échantillon est emballé avec un matériel absorbant dans un étui de« transportblister ». Cet emballage secondaire peut également être un sac plastique à fermeture à glissière. Le tout est ensuite placé dans une enveloppe ou une boîte.
- Les directives actuelles demandent que l’emballage extérieur porte le sigle suivant: UN3373 Biological Substance category B.
- Aucun matériel de prélèvement n’est prévu par le CNR.
Demandes non acceptées
- Échantillon abîmé ou ayant coulé dans l’emballage.
- Les échantillons pour lesquels il manque des informations.
Délai pour recevoir le résultat d’analyse (et fréquence d’analyse)
Les analyses sont réalisées à la demande (formulaire hors surveillance). En cas de demandes urgentes, merci de contacter le laboratoire avant l’envoi des souches.
- Maximum 10 jours ouvrables pour la recherche de toxines dans les selles ou sur culture par test immuno-enzymatique
- Maximum 42 jours ouvrables pour la recherche de l’effet cytopathogéne et des facteurs de virulence par PCR multiplex.
Communication des résultats des tests
- Par courrier.
- Si explicitement demandé sur le formulaire de demande, par fax ou e-mail.