Beschrijving van de test
De test bestaat uit:
- testen op toxines in ontlasting of kweek door middel van enzymatisch immuno-assays.
- het toxigene vermogen van C. difficile te evalueren aan de hand van het cytopathogene effect op celculturen.
- met een multiplex gelijktijdig de genen voor toxine B (tcdB), toxine A (tcdA), binair toxine (cdtA en cdtB) en de deleties van 18bp, 39bp en 54bp in het regulatiegen tcdC opsporen.
Doel van de test
De belangrijkste virulentiefactor van C.difficile is cytotoxine B. De meeste pathogene stammen zijn toxine A- en toxine B-positief (A+B+) of, wat zeldzamer is, toxine A-negatief en toxine B-positief (A-B+). Een klein aantal C.difficile-stammen produceert ook een binair toxine. De binaire toxinelocus bevat twee verschillende genen (cdtA en cdtB). Bij hypervirulente stammen zoals 027/NAP1/BI kunnen naast de A&B- en binaire toxinegenen ook mutaties in het toxine-downregulatiegen (tcdC), namelijk een deletie van 18bp en van een nucleotide op positie 117, worden aangetoond. Deze zouden van invloed zijn op de hoeveelheid toxine die de stam kan produceren.
Criteria voor het uitvoeren van deze test in het kader van de referentie activiteiten.
Na contact opgenomen te hebben met het laboratorium.
Instructies voor monsters
De stam moet als reincultuur worden aangeleverd en vers uitgeënt zijn op een geschikt medium. Geschikte media zijn: diepe gelose, bloedplaat anaeroob verpakt van type Anaerogen Compact (Oxoid), Anaerocult p (Merck) of andere dergelijke methodes, gereduceerde media, thioglycolaat of buisjes van het type « port a cul ». Hoewel het wordt aanbevolen om kweken op te sturen, accepteert het NRC ook stoelgangstalen.
Instructies voor het transport
- Transport kan het best gebeuren onder anaerobe omstandigheden. Vervoer bij kamertemperatuur als het monster binnen 6 uur na afname in het lab aankomt, of gekoeld binnen 72 uur (daarna kan de ontlasting worden ingevroren bij -20°C). Zorg ervoor dat de buisjes goed gesloten zijn om „lekken” te voorkomen; hiertoe kunt u het gesloten buisje in parafilm wikkelen.
- Het monster wordt met absorberend materiaal in een transportblisterverpakking verpakt. Deze secundaire verpakking kan ook een plastic zip-lock zakje zijn. Deze wordt dan in een enveloppe of doos gedaan.
- Volgens de geldende richtlijnen moet op de buitenverpakking het volgende symbool worden aangebracht: UN3373 Biologische stof categorie B.
- Het NRC stelt geen materiaal voor staalafname ter beschikking.
Onaanvaardbare aanvragen
Stalen die beschadigd zijn of gelekt hebben in de verpakking.
Stalen met ontbrekende informatie.
Turn around time (en de frequentie van analyse)
Analyses worden uitgevoerd op verzoek (niet-surveillance vorm). Neem voor dringende verzoeken contact op met het laboratorium voordat u de stammen opstuurt.
- Maximaal 10 werkdagen voor detectie van toxine in ontlasting of kweek door enzyme-linked immunosorbent assay.
- Maximaal 42 werkdagen voor testen op cytopatheogeen effect en virulentiefactoren door multiplex PCR.
Rapportering van testresultaten
- Per post.
- Indien uitdrukkelijk gevraagd op het aanvraagformulier, per fax of e-mail.