Doel van de test
Klinisch gebruik
Detectie van antivirale resistentie bij patiënten met een Human Herpesvirus 6A (HHV-6A) en 6B (HHV-6B) infectie.
Klinische achtergrond
De humane herpesvirussen 6A en 6B (HHV-6A en HHV-6B) zijn genetisch verwante herpesvirussen die behoren tot het genus Roseolovirus van de subfamilie beta-herpesvirinae. Ondanks een hoge genetische sequentie-identiteit (~90%) worden HHV-6A en HHV-6B erkend als twee verschillende soorten. Sequentieverschillen (bijvoorbeeld >30%) in belangrijke coderingsgebieden en significante verschillen in fysiologische en biochemische eigenschappen (zoals het gebruik van verschillende receptoren voor virale entry) onderstrepen de conclusie dat HHV-6A en HHV-6B verschillende virussen zijn binnen de β-herpesvirinae. Deze virussen zijn wereldwijd alomtegenwoordig en verantwoordelijk voor levenslange latente infecties, meestal asymptomatisch in de volwassen bevolking. Symptomatische ziekten worden vaak gezien bij zuigelingen of immuungecompromitteerde patiënten die het virus uit latentie reactiveren. HHV-6B primaire infectie is verantwoordelijk voor een goedaardige en veel voorkomende kinderziekte, exanthema subitum, ook bekend als roseola infantum of zesde ziekte.
Kenmerkend voor HHV-6 is de covalente integratie van zijn genoom-DNA in de telomeren van de cellenchromosomen [d.w.z. chromosomaal geïntegreerd HHV-6, ciHHV-6] in elke cel in het lichaam, en transmissie vindt plaats door Mendeliaanse overerving. Hoewel zeldzaam (bij ongeveer 1% van de bevolking), is dit een verstorende factor voor de diagnose van actieve virale infectie en de respons op antivirale therapie.
HHV-6A en HHV-6B zijn opportunistische pathogenen bij immuungecompromitteerde gastheren en reactivering of herinfectie kan leiden tot ernstige ziekten, waaronder encefalitis, colitis, pneumonitis, hepatitis, beenmergsuppressie, interstitiële pneumonitis, myelitis en huiduitslag.
Ganciclovir, foscarnet en cidofovir zijn bekend als remmers van de HHV-6 replicatie in vitro, maar er is tot nu toe geen medicijn formeel goedgekeurd om ernstige ziekten bij immuungecompromitteerde gastheren te behandelen. Profylactische of preventieve therapie wordt niet aanbevolen om HHV-6 reactivering of encefalitis na transplantatie te voorkomen. Ganciclovir, foscarnet en eventueel cidofovir kunnen worden gebruikt om ernstige HHV-6-ziekten bij immuungecompromitteerde individuen te behandelen, in het bijzonder degenen die lijden aan HHV-6 encefalitis. Deze drie antivirale middelen vertonen dezelfde werkzaamheid tegen zowel HHV-6A als HHV-6B in vitro, waarbij de werkingsmechanismen van antivirale activiteit voor zowel HCMV als HHV-6 vergelijkbaar zijn.
Criteria voor het uitvoeren van deze test in de context van referentieactiviteiten
In vitro studies ondersteunen het potentieel voor de ontwikkeling van HHV-6A of HHV-6B resistentie tegen de bovengenoemde antivirale middelen, hoewel er slechts weinig studies zijn die geneesmiddel-resistente isolaten vonden na langdurige blootstelling in de klinische setting. Hoewel (val)ganciclovirbehandeling voor CMV-ziekte niet leidde tot het ontstaan van geneesmiddel-resistente HHV-6-mutanten bij solid orgaantransplantatiepatiënten na een grote prospectieve studie, moet worden overwogen dat geneesmiddelresistente HHV-6 kan ontstaan na langdurige profylaxe of behandeling van CMV-ziekte met ganciclovir. Patiënten die zich presenteren met HHV-6 encefalitis die niet reageren op antivirale therapie, moeten snel worden getest op het ontstaan van geneesmiddelresistentie.
Testdetails
Bevat:
- (Val)ganciclovir-resistentie: mutaties in de HHV-6A of HHV-6B U69 eiwitkinase en U38 DNA-polymerase genen.
- Cidofovir-resistentie: mutaties in de HHV-6A of HHV-6B U38 DNA-polymerase gen.
- Foscarnet-resistentie: mutaties in de HHV-6A of HHV-6B U38 DNA-polymerase gen.
Testomschrijving
1. Isolatie van DNA uit het monster.
2. Amplificatie van de virale genen die betrokken zijn bij geneesmiddelresistentie door PCR volgens de therapie die aan de patiënt is gegeven.
|
HHV-6A/6B gene |
HHV-6A/6B encoded protein |
Function / drug target |
Codons sequenced (partial or complete gene sequence) |
Drug(s) for which resistance is predicted |
|
U69 |
U69 protein kinase |
Involved in ganciclovir activation |
1-563 (complete sequence) |
(Val)ganciclovir |
|
U38 |
DNA polymerase |
Target of ganciclovir, foscarnet, cidofovir |
250-800 ( partial sequence) |
(Val)ganciclovir, foscarnet, cidofovir |
3. Directe sequencing van de amplicons door Sanger dideoxy sequencing, met een detectiegrens van virale mutant-subpopulaties van 20%-30%.
4. Sequentie-alignering (de afgeleide sequenties van het patiëntmonster worden vergeleken met de referentie-sequenties van HHV-6A stam GS of HHV-6B stam Z29).
5. Gedetecteerde mutaties worden vergeleken met een database van bekende mutaties die geassocieerd zijn met geneesmiddelresistentie of natuurlijke polymorfismen (inter-stamvariabiliteit) om te bepalen of de klinische resistentie van HHV-6A/6B-infectie te wijten is aan virale geneesmiddelresistentie.
Interpretatie van de resultaten
De resultaten bevatten een lijst van de gedetecteerde mutaties en hun associatie met resistentie tegen elk specifiek geneesmiddel, inter-stamvariabiliteit of onvoorspelbare betekenis (nieuwe veranderingen). Afhankelijk van het virale genotype worden alternatieve therapeutische opties voorgesteld.
Een resultaat van niet-beschikbaar of onvolledig genotyperen geeft aan dat niet alle virale amplicons konden worden geamplificeerd en sequenties konden worden verkregen. Dit kan te wijten zijn aan onvoldoende virale lading, kwaliteit van het monster (opslag- en transportomstandigheden, leeftijd van het monster) en/of de aanwezigheid van PCR-inhibitoren.
Beperkingen van genotypische tests voor HHV-6A/6B geneesmiddelresistentie
- Testresultaten kunnen mutaties missen die aanwezig zijn in 20-30% van de virale populatie.
- Tests zijn het meest betrouwbaar als de virale lading in het monster minimaal 3 log10 IU/ml (1.000 IU/ml) is. Resultaten voor monsters met lagere virale ladingen moeten met voorzichtigheid worden geïnterpreteerd en moeten worden bevestigd met een nieuw monster.
- Omdat genotypische artefacten kunnen optreden, vooral in gemengde mutante populaties van monsters met lage virale lading, wordt retesten in een nieuw monster aanbevolen.
Instructies voor monsters en transport
https://rega.kuleuven.be/regavir/shipping
Onaanvaardbare verzoeken
- Onjuist of onvoldoende monster.
- Onjuist transport of opslag van het monster.
- Testaanvraagformulier niet volledig ingevuld zonder het virus waarvoor geneesmiddelresistentie moet worden onderzocht te specificeren.
Doorlooptijd (en frequentie van analyses)
Frequentie van analyses: elke werkdag, tijdens werkuren.
Doorlooptijd: 3-5 werkdagen.
Rapportage van testresultaten
Resultaten worden via e-mail verzonden volgens de wensen van het verzoekende laboratorium of arts.